### RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南

尊龙凯时人生就博为您提供详细的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养说明，确保您的细胞实验顺利进行。

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议1:2传代，每两天换液

备注：使用无菌离心管收集培养基，以备对比实验，如果对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

#### 二、细胞处理步骤

收到细胞后，应将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞在运输过程中的稳定性。收到细胞后，应使用75%酒精喷洒细胞瓶，进行消毒后在超净台下进行无菌操作，并将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为售后保障依据，若未提供则默认细胞状态良好。

#### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：若汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基培养；若超80%，则进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶 - 0.53mM EDTA），37℃消化1-2分钟，观察细胞情况；若细胞大多变圆脱落，迅速加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代，填充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存：当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，PBS清洗一次后，添加1ml消化液；待细胞回缩变圆后，加5ml完全培养基终止消化。轻轻吹打使细胞脱落，再转移到15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清后加入1ml的无血清冻存液，混匀后加入冻存管中。将冻存细胞放入-80℃冰箱，随后可转入液氮罐。

c. 细胞复苏：从液氮中取出冻存管，迅速在37℃水浴中解冻。用75%酒精消毒后，将细胞转入含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟。弃上清后用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱继续培养，第二天更换新鲜完全培养基。

#### 四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会发生脱落，这是正常现象。建议将培养瓶中的液体收集到离心管，1000RPM离心后，收集上清进行过渡培养，并按照上述方法进行细胞的再次消化和传代。

#### 五、售后条款

如细胞在运输过程中出现问题，可重发的情况包括：运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏出等；细胞污染问题需在收到后48小时内提供实验结果以便核实；如细胞存活率低，也请提供照片作为依据。对于客户造成的污染及操作不当所引起的问题，则不予以重发。

感谢您选择尊龙凯时人生就博的产品，我们将竭诚为您提供支持与帮助！