尊龙凯时人生就博提供的人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养说明书如下：

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10%FBS+1%丙酮酸钠+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

贴壁传代方法：建议按照1:2比例进行第一次传代，通常每2天换液。

备注：应使用无菌离心管收集培养基，以留作过渡对比培养。如果对比效果不佳，建议购买我们的全套培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞达到良好状态后，应向瓶内注入适量的完全培养液并密封，是运输细胞的最佳方式。在收到细胞后，首先用75%酒精喷洒消毒整个细胞瓶，再放至超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长状况，并进行不同倍数的拍照保存，前三天的照片尤为重要，若未提供照片将默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，需将培养液收集至离心管中，并保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱内培育；若超出80%，则可直接进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆且脱落，迅速将其撤回操作台，轻敲瓶底并加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻拍打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并补充1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代，并补充新培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶1ml并倒置观察，待细胞收缩变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，悬液转移至15ml离心管，进行1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入1ml尊龙凯时人生就博无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞直接保存于-80℃冰箱，如后需转入液氮罐中，需在-80℃保存24小时以上后再进行转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，再用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱内培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

一些细胞可能在运输过程中出现脱落现象，这是正常的。如果脱落严重，应将培养液收集至离心管，进行1000 RPM离心后，通过添加胰酶重悬并消化处理，然后再次分瓶传代。确保在37℃、5% CO2环境下培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况及判定标准

1. 在运输过程中遇到细胞丢失、瓶身破损或培养液严重泄漏等情况，可以重发。
2. 若收到的细胞污染，请在48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温运输细胞若静置24小时，干冰运输细胞复苏后24小时内，若未存活，应提供照片，重发。
4. 如干冰运输细胞复苏后24小时或常温运输细胞静置4小时并未开封出现污染，均可重发。
5. 若在7天内有活性问题，请通过台盼蓝染色法验证细胞活力，核实后重发。
6. 请在收到细胞当天及接下来的2-3天内拍照，若未在3天内告知，则视为产品合格。
7. 如在4-7天内出现问题，需提供前三天的照片、出现问题时的照片及相关操作详细步骤，技术人员判断为我方责任的，将进行重发处理。

2）细胞出现问题不予重发的情况

1. 客户自造成的细胞污染，不予重发。
2. 不当操作导致细胞状态不佳，不予重发。
3. 非推荐培养体系导致的细胞状况不良，不予重发。
4. 若在细胞状态不良的情况下未提供前三天照片，不予重发。
5. 凡在培养过程中经其他处理的情况，不予重发。
6. 客户在收到细胞后的2天内未反映问题，不予重发。
7. 其他情况将具体情况而定。

如需更多信息或支持，欢迎联系尊龙凯时人生就博。我们始终致力于为科研提供高质量的细胞产品和服务。