## 大鼠肝星形细胞THSC培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC

生长特性：冻存条件采用无血清冻存液，培养体系为DMEM。建议的传代比例为1:2，传代间隔为2天。

备注：请使用无菌离心管收集瓶内培养基，以便进行对比培养。如果对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，请尽快培养至良好状态，并灌满完全培养液，封好瓶口，以确保细胞在运输过程中的稳定性。收到细胞后，用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后放入超净台内确保无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞稳定状态后再进行处理。请在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存（建议拍摄40x, 100x, 200x倍的细胞图像各一张）。前三天的照片为重要的售后依据，若不提供照片则视为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并置于37℃、5% CO2的培养箱中；若细胞密度超过80%，请进行如下传代步骤：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS对细胞进行1-2次润洗。
2. 添加约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞大小变化，若细胞已变圆并脱落，请迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，请按以下步骤进行冻存：

1. 弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变化，待细胞收缩后，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，将沉淀细胞加入1ml尊龙凯时人生就博无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如后续需转入液氮罐中，请提前在-80℃存放24小时以上。

c、细胞复苏：请遵循以下步骤进行细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管，以防护面具保护，快速置于37℃水浴中解冻，直至管内无冰结晶，随后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，补充5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项：某些细胞可能贴壁不牢，运输过程中易发生脱落，属正常现象。如发现脱落过多，请将培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作对比培养。沉淀后加入胰酶（1-2ml），轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟，然后再加入5ml完全培养基终止反应后离心，弃上清，重悬并按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款：

1）细胞问题可重发的情况：包括运输过程中细胞丢失、培养基严重漏液等；细胞污染问题需在收到产品48小时内提供实验结果以核实；常温发货细胞静置及干冰发货后的细胞复苏效果不佳，需提供清晰照片；如冷冻细胞在配送后出现情况并未开封，也可重发。

2）不予重发的情况：若细胞污染由客户造成；操作不当导致细胞状态不良；非推荐培养体系造成的细胞问题等，无重发资格。收件后2天内未告知不良情况、且情况复杂则视具体情况而定。

通过遵循上述步骤与注意事项，可以确保您获得最佳的细胞培养体验。如需进一步了解或咨询，请随时与尊龙凯时人生就博联系，我们将竭诚为您服务。