本试剂盒专为科学研究而设计,严禁用于医学诊断。该试剂盒运用的是双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA),其检测原理如下:首先,将样本、标准品和HRP标记的检测抗体依次加入预先包被了adropin(AD)抗体的微孔中,经过适当的温育和洗涤后,使用TMB底物进行显色反应。TMB在过氧化物酶的催化下,会先转化为蓝色,并在酸的作用下最终形成黄色。样品中adropin(AD)的浓度与颜色的深浅成正相关。最后,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),以计算样品浓度。
该试剂盒的具体组成包括:
- 微孔酶标板:12孔×8条,适用于96孔检测。
- 标准品:03mL*6管,浓度为0、25、50、100、200、400 pg/mL。
- 样本稀释液:6mL。
- 检测抗体-HRP:10mL。
- 20×洗涤缓冲液:25mL。
- 底物A和B:各6mL。
- 终止液:6mL。
- 封板膜:2张。
- 说明书:1份。
试剂盒的保存条件为2-8℃,有效期为6个月。
样品的收集、处理及保存方法如下:
- 血清:使用不含热原和内毒素的试管,避免细胞刺激。采集后,3000转离心10分钟,以分离血清和红细胞。
- 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,3000转离心30分钟以取上清。
- 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒。
- 组织匀浆:组织与生理盐水混合,捣碎后3000转离心10分钟取上清。
- 保存:样本若未及时检测,请分装并冻存于-20℃,避免反复冻融。
自备设备包括:酶标仪(450nm)、高精度加样器及枪头(0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL),以及37℃恒温箱。
操作注意事项:
- 试剂盒从冷藏状态取出后,应在室温平衡15-30分钟后再使用。
- 洗涤液可能会结晶,稀释时可加热帮助溶解。
- 确保每个加样步骤使用加样器,并定期校准,以减少实验误差。
- 每次测定应同时制备标准曲线,并做复孔测试。
- 封板膜应作为一次性使用,以防交叉污染。
- 试剂操作 strictly according to 手册进行,实验结果应以酶标仪读数为准。
- 底物要避光保存,所有样品及废液需按传染物质处理。
- 不同批号的试剂不得混用。
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